Resumo A sincronia espacial e temporal e a compatibilidade entre o oócito receptor e o núcleo celular doador são necessárias para o processo de clonagem de embriões a fim de permitir a reprogramação nuclear e o desenvolvimento embrionário precoce. O objetivo do presente estudo foi avaliar três métodos de sincronização do ciclo celular em uma cultura primária de fibroblastos bovinos durante 24, 48 ou 72 h. Estes fibroblastos foram utilizados como doadores nucleares para avaliar o seu potencial de desenvolvimento in vitro e a qualidade dos embriões produzidos por meio da técnica de Handmade cloning (HMC). Não foram encontradas diferenças entre os métodos utilizados para a sincronização de fibroblastos em G0 / G1 (p> 0,05). Produção de clones de fibroblastos nos quatro grupos - sem tratamento a 0 h e com restrição de soro RS, alta confluência celular ACC e RS + ACC às 24 h - resultou em altas taxas de clivagem que não foram diferentes. As taxas de produção de embriões foram de 37,9%, 29,5% e 30,9% nos grupos 0h, RS24h e RS + ACC24h, respectivamente, e 19,3% no grupo ACC, que foi significativamente diferente dos outros três (p <0,05). Não houve diferenças no parâmetro de qualidade entre os clones produzidos com fibroblastos submetidos à sincronização diferente. Finalmente, quando a produção geral de clones foi comparada versus partenotos e embriões de FIV, a única diferença foi entre clones e embriões partenogênicos com zona pelúcida (30,2% vs 38,6%). O número de blastômeros dos blastocitos produzidos através da FIV foi significativamente maior do que os de embriões ativados partenogeneticamente e de clones (117, 80, 75,9 e 67,1, respectivamente). A avaliação de três métodos de sincronização em diferentes pontos de tempo não demonstrou um aumento na porcentagem de fibroblastos nas fases G0/G1 do ciclo celular. No entanto, obteve-se boa qualidade e altas taxas de clonagem, sugerindo que nem sempre é necessário submeter as células a quaisquer tratamentos de sincronização, uma vez que renderiam resultados de clonagem igualmente bons.

Abstract Spatial and temporal synchrony and compatibility between the receptor oocyte and the donor cell nucleus are necessary for the process of embryo cloning to allow nuclear reprogramming and early embryonic development. The objective of the present study was to evaluate three cell cycle synchronization methods on a primary bovine fibroblast culture for 24, 48, or 72 h. These fibroblasts were used as nuclear donors to evaluate their in vitro developmental potential and the quality of the embryos produced through handmade cloning (HMC). No differences were found between the methods used for fibroblast synchronization in G0/G1 (p > 0.05). Production of clones from fibroblasts in four groups- no treatment at 0 h and using serum restriction SR, high culture confluence HCC, and SR+HCC at 24 h- resulted in high cleavage rates that were not different. Embryo production rates were 37.9%, 29.5%, and 30.9% in the 0h, SR24h, and SR+HHC24h groups, respectively, and 19.3% in the HCC group, which was significantly different from the other three (p < 0.05). There were no differences in the quality parameter among the clones produced with fibroblasts subjected to the different synchronization. Finally, when overall clone production was compared versus parthenotes and IVF embryos, the only difference was between clones and parthenogenetic embryos with zona pellucida (30.2% vs 38.6%). The number of blastomeres from the blastocytes produced through IVF was significantly greater than those from embryos activated parthenogenetically and from clones (117, 80, 75.9, and 67.1, respectively). The evaluation of three synchronization methods at different time points did not demonstrate an increase in the percentage of fibroblasts in the G0/G1 phases of the cell cycle; however, good quality and high cloning rates were obtained, suggesting that it is not always necessary to subject the cells to any synchronization treatments, as they would yield equally good cloning results.

Los niveles de la hormona leptina y la expresión de sus receptores en glándula mamaria bovina parecen ejercer una función en el desarrollo del tejido secretor durante la pubertad. Se ha relacionado la presencia de estos receptores con mamogénesis y con regulación de síntesis de ácidos grasos. Existen estudios de la hormona y su receptor durante la pubertad y en el período posparto. También, se conoce acerca de presencia de los transcriptos de la hormona y de su receptor en glándula mamaria, en vacas secas preñadas, así como en el período de lactancia. Así, el objetivo de este estudio fue estudiar la expresión (transcripto y proteína) de los receptores de leptina, isoformas Ob-ra y Ob-rb, en glándula mamaria de vacas Holstein, durante la lactancia vs. el periodo seco. Se confirmó, por medio de las técnicas de RT-PCR y de Western blot, que los receptores de leptina se expresan en glándula mamaria. Los resultados de la RT-PCR mostraron expresión de ambas isoformas (ARNm) en los dos periodos, sin diferencia estadística; sin embargo, la proteína de la isoforma Ob-ra fue identificada solo en el periodo seco, mientras que la de la isoforma Ob-rb fue encontrada durante la lactancia y en el periodo seco, sin diferencia estadística, al comparar los niveles de expresión. Los datos muestran un perfil de expresión diferente en las vacas Holstein del estudio, en comparación con lo reportado en la literatura para otros rumiantes no especializados, en la producción de leche.

Leptin hormone levels and expression of its receptors in mammary gland may be important regulators of secretory tissue during puberty. Receptor expression has been related with mammogenesis and with fatty acids synthesis. There are studies about the hormone and its receptors during puberty and postpartum. Also, the transcripts of leptin and receptors have been described in dry pregnant cows' mammary gland as well as during lactating period. The objective of this study was to determine the expression level of leptin receptors (transcripts and proteins), isoforms Ob-ra and Ob-rb, in Holstein cows during lactation vs. dry periods. The presence of leptin receptors in mammary gland was confirmed by RT-PCR and Western blot technics. However, the Ob-ra was identified only in no lactating cows while isoform Ob-rb was found in both lactating and dry periods without statistical difference when levels of expression were compared. RT-PCR results indicated mRNA expression of both isoforms receptors with no significant difference when two periods were compared. Data suggest a differential profile of expression of leptin receptors in Holstein cows of this study compared to reports in no specialized milk producer ruminants.

La leptina es una hormona proteínica que participa en procesos fisiológicos relacionados con la regulación del metabolismo energético, reproducción, inmunidad, cáncer, lactancia, entre otros. Su receptor se expresa en casi la totalidad de los tejidos, presentando seis isoformas a partir de un mismo ARNm. La isoforma predominante en la glándula mamaria bovina es la Ob-Rb, a través de la cual se puede desencadenar una cascada de señalización por medio de las moléculas JAK-STAT, para inducir proliferación, diferenciación y apoptosis celular de acuerdo al estadio reproductivo de la hembra. En pequeños rumiantes, tales como ovejas y cabras, los niveles de leptina y su receptor varían considerablemente durante la preñez y lactancia: son altos al inicio de la gestación, tienden a descender hasta la mitad de esta etapa y permanecen bajos hasta la finalización de la lactancia. En la glándula mamaria de bovinos aún no se ha establecido un patrón de expresión de los receptores durante diferentes etapas reproductivas, estudio que se considera importante y necesario para comprender el efecto de la leptina sobre su receptor en glándula mamaria, especialmente durante la lactancia, período durante el cual sufre una remodelación celular del tejido glandular para sostener una alta producción láctea. En la presente revisión se plantea una hipótesis de cómo podría ser la vía de señalización desencadenada por el receptor de leptina en la glándula mamaria durante la lactancia.

Leptin is a hormone-like protein involved in physiological processes related to the regulation of energy metabolism, reproduction, immunity, cancer, breastfeeding, among others. Leptin receptor is expressed in almost all tissues and generates six isoforms from a single mRNA. The predominant isoform in bovine mammary gland is the Ob-Rb, which triggers a signaling cascade through JAK-STAT molecules to induce proliferation, differentiation and apoptosis, according to the female reproductive stage. In small ruminants, such as sheep and goats, leptin and its receptor levels vary widely, being high at the beginning of pregnancy, tending to fall in mid-gestation, and remaining low until the end of lactation. An expression pattern of leptin receptor has not yet been established for the various reproductive stages in bovine mammary gland. Such study is considered important and necessary to understand the effect of leptin via its receptor in mammary gland, especially during lactation when the gland undergoes tissue remodeling to sustain high milk production. This review presents a hypothesis about the signaling pathway triggered by leptin receptor in the mammary gland during bovine lactation.

A leptina é um hormônio protéico envolvido em processos fisiológicos relacionados com a regulação do metabolismo energético, reprodução, imunidade, câncer, lactação, entre outros. Seu receptor é expresso em quase todos os tecidos e apresenta seis isoformas a partir do mesmo mRNA. A isoforma predominante na glândula mamária bovina é a Ob-Rb, através da qual é desencadeada uma cascata de sinalização através das moléculas JAK-STAT para induzir a diferenciação, proliferação e apoptose de acordo com o estágio reprodutivo da fêmea. Em pequenos ruminantes, como ovinos e caprinos, os níveis de leptina e seu receptor variam consideravelmente durante a gravidez e a lactação. São altos no início da gravidez, tendem a cair na metade dessa fase e permanecem baixos até o final da lactação. Ainda não foi estabelecido um padrão de expressão do receptor de leptina na glândula mamária de bovinos durante diferentes estágios reprodutivos. O estudo deste tema é importante e necessário para entender o efeito da leptina sobre o seu receptor na glândula mamária, especialmente durante a lactação, periodo no qual a glândula mamária sofre remodelação do tecido glandular com a finalidade de sustentar a alta produção de leite. A presente revisão apresenta uma hipótese sobre a via de sinalização que é desencadeada pelo receptor da leptina na glândula mamária durante a lactação.

La brucelosis canina tiene impacto en la producción canina y en la salud pública, a nivel mundial, ya que genera pérdidas económicas a los criadores por infertilidad y por abortos, y existe el riesgo de transmisión zoonótica a los trabajadores y a los propietarios de mascotas. En Colombia, se conoce muy poco acerca de la frecuencia de presentación de la enfermedad, además, no existen leyes sanitarias que la regulen. En el laboratorio Syngamia de la Universidad de Antioquia, se ofrece el diagnóstico desde 2005, con la prueba tamiz de aglutinación rápida, en placa con 2β-mercaptoetanol y hemocultivo confirmatorio. A partir de los resultados obtenidos de los pacientes remitidos a este laboratorio, se halló una frecuencia de presentación del 11% de seropositividad, en el ámbito regional. Al analizar las historias clínicas, se encontró, por una parte, que los propietarios consultan muy poco al Médico Veterinario, y aquellos que consultan encuentran una diversidad de criterios sobre las acciones a seguir, cuando el criadero o la mascota resultan positivos a la enfermedad. El objetivo de este estudio es mostrar la casuística de tres años de servicio diagnóstico y las aproximaciones que se propusieron para el posible control de la enfermedad.

Canine brucellosis has impact on kennels and worldwide public health, generating economic losses for breeders caused by infertility and abortions, and potentiating the risk of zoonotic transmission by pets and workers. In Colombia, little is known about the frequency of the disease and there are no regulations for control or prevention of the illness in animals or humans. At the Universidad de Antioquia in the "Syngamia" Laboratory the diagnosis is offered since 2005, with the agglutination probe with 2β-mercaptoetanol and hemoculture for confirmation of the positives samples. Taking into account the results obtained in the lab, the frequency of seropositivity is 11% in the region; when the histories were analyzed it was found that breeders and pet owners do not use the veterinary service, and those that attend the clinic received a diversity of criteria about what to do when animals are positive. The objective of this study was to show the results of three years casuistic in our lab and to propose a protocol for control of the illness based on our experience and laws of other countries legislation.